Методы диагностики in Vivo

• Главная
• Учебное видео по медицине
• Библиотека книг по медицине
• Контактная информация

Медицинская микробиология:

• Медицинская микробиология
• Общая медицинская микробиология
• Санитарная микробиология
• Частная микробиология
• Вирусология
• Возбудители оппортунистических инфекций
• Книги по медицинской микробиологии на МедУнивере
• Иностранные книги по медицинской микробиологии на МедУнивере
• Раздел статей по микробиологии на МедУнивере

Аллергические методы диагностики туляремии

Диагноз туляремии основывается на данных клинического, эпидемиологического и лабораторного анализов. Весьма важное значение принадлежит эпидемиологическому анамнезу, который должен быть детальным и исчерпывающим. Особое внимание должно быть уделено выяснению наличия вакцинации против туляремии в прошлом и ее сроков, данным о переболевании этой инфекцией ранее, установлению профессиональной занятости и ряду других факторов, необходимых для того, чтобы в каждом отдельном случае подтвердить или исключить диагноз туляремии. Все это необходимо для определения тактики лечения, а также проведения профилактических мероприятий.

How to prepare and connect the probe — ZEISS CONVIVO In Vivo Pathology Suite

В случаях туляремии с наружными клиническими проявлениями (язвенно-бубонная, бубонная, глазо-бубонная, ангинозно-бубонная формы) при учете эпидемиологических данных диагноз не вызывает затруднений. Что касается легочной и абдоминальной форм туляремии, то здесь существенная роль принадлежит анамнестическим данным и результатам лабораторного анализа.

Лабораторная диагностика туляремии у людей основывается главным образом на иммунологических методах (сероаллергическая диагностика) и в меньшей степени на бактериологических.

Аллергические методы. В патогенезе туляремийной инфекции значительную роль играет развитие гиперчувствительности замедленного типа (ГВТ), выявление которой может служить методом аллергической диагностики туляремии. Метод основан на особенностях организма человека, заболевшего или переболевшего туляремией, отвечать местной аллергической реакцией в виде гиперемии и инфильтрата на введение туляремийнош антигена (тулярина). У больных туляремией людей кожная аллергическая реакция становится положительной обычно с 3—5-х суток болезни, реже в более поздние сроки и сохраняется многие годы, благодаря чему аллергический метод служит для ранней и ретроспективной диагностики, являясь при этом строго специфичным.

У привитых живой вакциной также возникает аллергическая реактивность, но она развивается медленнее (через 10-15 дней после вакцинации), удерживается 5-6 лет, иногда дольше, и может служить методом определения сохранности поствакцинального иммунитета. Кожную аллергическую реакцию выполняют как накожно, так и внутрикожно с соответствующим препаратом тулярина. В качестве диагностического приема у больных проба с. тулярином должна применяться с осторожностью.

How to use basic functions of the dashboard — ZEISS CONVIVO In Vivo Pathology Suite

Для внутрикожной пробы используют внутрикожный тулярин — взвесь туляремийных бактерий вакцинного штамма, убитых нагреванием при 70°С в течение 1 ч. В 1 мл препарата содержится 500 млн. убитых бактерий. Выпускают препарат в запаянных ампулах, содержащих 1 мл препарата (или 10 человеко-доз). Препарат предназначен в первую очередь для диагностики туляремии.

Тулярин в количестве 0,1 мл вводят стерильным шприцем строго внутрь кожи левого предплечья (на границе верхней и средней трети). На месте введения препарата образуется беловатый пузырек диаметром 3-4 мм, который примерно через 30 мин рассасывается.

Учет реакции производят через 24-48 ч путем осмотра и ощупывания участка кожи, куда был введен тулярин. При положительной реакции на месте введения тулярина уже через 6-10 ч обнаруживаются покраснение (гиперемия) и отек (инфильтрат). Через 24 ч реакция кожи выражена вполне отчетливо и имеет вид гиперемированного, нередко болезненного инфильтрата.

Реакцию считают положительной при наличии инфильтрата и гиперемии диаметром не менее 0,5 см. Интенсивность реакции определяют по величине реагирующего участка (отека и гиперемии) кожи, исчезающей через 48 ч. В сомнительных и подозрительных случаях возможна повторная постановка реакции, так как отрицательный результат мог быть обусловлен ранним сроком от начала заболевания. Аллергическая реакция может запаздывать также при тяжелых формах инфекции, при раннем применении антибиотиков для лечения больного.

В ряде случаев аллергическая реакция сопровождается образованием пустулы или кратковременным лимфангоитом с незначительным увеличением регионарных лимфатических узлов и повышением температуры тела на 1-1,5°С в течение 1-2 дней. Известны редкие случаи образования некроза на месте инъекции тулярина. В этой связи для диагностики туляремии предпочтительнее использовать аллергические методы in vitro или серологические методы.

Для накожной пробы применяют накожный тулярин — взвесь туляремийных бактерий вакцинного штамма, убитых нагреванием при 70°С в течение 1 ч. В 1 мл препарата содержится 10 млрд, убитых бактерий. Выпускают препарат в запаянных ампулах, содержащих 1 мл, что составляет 20 человеко-доз. Препарат предназначен в первую очередь для определения иммунитета у привитых против туляремии или для ретроспективного обследования.

Учет реакции производят через 48-72 ч. Положительная реакция выражается отечностью кожи вокруг насечек и краснотой, которые иногда появляются уже через 24 ч после введения тулярина, через 48-72 ч реакция ярко выражена и далее постепенно угасает, полностью исчезая к 7-10-му дню. Диаметр реагирующего участка достигает 1-2 см.

В редких случаях по ходу насечек появляются везикулы, исчезающие через 2-3 дня. Реакцию считают положительной при величине реагирующего участка кожи не менее 0,5 см и наличии вдоль насечек ясного покраснения и небольшой отечности (валик). При правильной технике постановки накожная туляриновая проба по чувствительности не уступает внутрикожной, но, в отличие от последней, не сопровождается повышенными местными или общими реакциями. Аллергические методы диагностики in vivo (накожная и внутрикожная туляриновые пробы) просты в исполнении и до настоящего времени используются на практике.

Вместе с тем введение даже убитого антигенного препарата небезразлично для организма обследуемого. В этой связи заслуживает внимания эффективный метод выявления и оценки гиперчувствительности методом in vitro при помощи альтерации лейкоцитов — реакции лейкоцитолиза (РЛ).

Последняя основана на учете разрушения лейкоцитов сенсибилизированного организма под влиянием специфического аллергена (антигена), регистрируемого методом in vitro. РЛЛ становится положительной уже в первые дни после вакцинации или заболевания (3-4-й день) и удерживается в течение многих лет (у переболевших — до 40 лет). На 7-15-й день после вакцинации показатели лизиса лейкоцитов составляют в среднем 49-50%, затем постепенно снижаются, но даже через 1-5 лет после вакцинации остаются на достаточно высоком уровне (30-31%). РЛ обладает строгой специфичностью, дает возможность количественного учета степени сенсибилизации организма, позволяет получить ответ через несколько часов после взятия крови, осуществляется in vitro, г.е. без введения в организм специфического аллергена.

В 2 лунки полистироловой пластины вносят по 50 мкл 10%-ного раствора цитрата натрия, затем в первую (опытную) лунку добавляют 50 мкл антигена (накожного тулярина, содержащего 1х10 10 бактерий в 1 мл), а во вторую (контрольную) — 50 мкл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Таким образом, в обеих лунках конечная концентрация цитрата натрия составляет 5%.

Кровь для исследования берут из пальца руки и в количестве 100 мкл вносят в каждую из двух лунок. Пластинку закрывают и помещают на 2 ч в термостат при температуре 37°С. Кровь в лунках тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Затем по 20 мкл крови из обеих лунок поочередно забирают при помощи микропипеточного дозатора и переносят в соответствующие лунки планшета для макроагглютинации, содержащие 0,4 мл 3%-ной уксусной кислоты, подкрашенной до светло-голубого цвета метиленовым синим.

Число лейкоцитов в крови из обеих лунок подсчитывают в камере Горяева. Разрушенные клетки, а также клетки, собирающиеся в кучки, не учитывают. Коэффициент лейкоцитолиза вычисляют но формуле: К = (Мk- Mo)*100/Мk, где Mo— число лейкоцитов в опыте (первая лунка); Мk— число лейкоцитов в контроле (вторая лунка).

Для оценки результатов используют следующую шкалу показателей:

К = 15% — отрицательный или сомнительный результат;

К = 16-20% — слабоположительный результат;

К = 21-30% — положительный результат;

К = 31% и выше — резко положительный результат.

Редактор: Искандер Милевски. 1.2020

1. Возбудитель туляремии (Francisella tularensis): морфологические, культуральные и биохимические свойства
2. Факторы патогенности и генетика возбудителя туляремии (F. tularensis)
3. Клинические проявления туляремии
4. Иммунитет при туляремии
5. Эпидемиология туляремии
6. Аллергические методы диагностики туляремии
7. Серологические методы диагностики туляремии
8. Бактериологический метод диагностики туляремии
9. Биологический метод диагностики туляремии
10. Эпизоотологические исследования туляремии
11. Лечение и профилактика туляремии

Источник: dommedika.com

Тесты диагностики in vitro

С нашей точки зрения это наиболее эффективные и безопасные тесты этиологической диагностики аллергических заболеваний, которые в будущем должны заменить тесты in vivo кроме пробы с исключением предполагаемого аллергена.

Наибольшее распространение среди этих тестов получил радиоаллергоадсорбентный тест (РАСТ). РАСТ позволяет измерить уровень специфических по отношению к аллергенам антител. Сущность метода заключается в том, что если в крови присутствуют аллергенспецифические IgE-антитела, то они связываются с соответствующими аллергенами, фиксированными на инертной матрице.

После добавления радиоактивных анти-IgE-антител они связываются с образовавшимися комплексами аллерген-IgE-антитело и учет радиоактивности дает уровень специфических к данному аллергену IgE-антител. РАСТ позволяет проводить аллергодиагностику и в острой стадии заболевания; на результаты теста на влияют фармпрепараты и другие факторы; отмечается хорошая корреляция теста с тяжестью течения заболевания. Основным недостатком РАСТ является его достаточно высокая стоимость. Однако появление различных модификаций РАСТ (энзимный аллергоадсорбентный тест, флюоресцентный аллергоадсорбентный тест, комбинированный аллергоадсорбентный тест, иммунопероксидазная система и др.) позволяет надеяться на преодоление этого недостатка.

Тест Шелли или непрямой тест дегрануляции базофилов также получил широкое распространение. В основе реакции связывание базофилами животных Fc-фрагментов IgE-антител при добавлении к этим клеткам сыворотки крови больных аллергическими заболеваниями. После добавления специфических к этим IgE-антителам аллергенов наступает дегрануляция сенсибилизированных таким образом базофилов и выделение БАВ. Индикатором реакции является процент дегранулированных базофилов.

Помимо этих наиболее распространенных тесов применяют реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА), реакцию преципитации, непрямой тест дегрануляции базофилов человека, метод иммуноблоттинга, определение аллергеннейтрализующей активности сыворотки крови, реакцию аллергенспецифического повреждения гранулоцитов и др.

Этиологическая диагностика имеет первостепенное значение не для диагностики аллергических заболеваний, а для терапии, поскольку только при адекватной этиологической диагностике возможна эффективная специфическая иммунотерапия (СИТ), позволяющая рассчитывать на длительную ремиссию.

4. Лечение аллергических заболеваний.

Фактически каждый врач сталкивается с этой проблемой, однако, у боль-

шинства из них результаты лечения аллергических заболеваний оставляют чувство неудовлетворенности. Мы проанализировали достаточно литературы, посвященной этой проблеме и с сожалением вынуждены констатировать, что общая тенденция всех рекомендаций по лечению аллергических заболеваний укладывается в попытки получить максимальный результат с минимальными затратами труда, против чего в свое время предостерегал молодых врачей А. Ф. Билибин.

Основная масса врачей по окончанию ВУЗ-а достаточно четко представляет, что при встрече с аллергическими заболеваниями надо применять антигистаминные препараты или другие нейтрализаторы БАВ, и это представление закрепляется, как правило, на всю оставшуюся жизнь. Действительно, нейтрализация БАВ, составляющих основу патохимической стадии ГНТ, дает быстрый и яркий клинический эффект, предотвращая патофизиологические расстройства, лежащие в основа клинических проявлений большей части аллергических заболеваний, однако это лишь часть патогенеза, следствие, а не причина аллергических заболеваний и дает больному лишь передышку, а не лечение. Отсутствие патогенетического мышления при встрече с аллергическими заболеваниями и ориентация лечения на патохимическую стадию, по всей вероятности является одним из факторов широкого распространения аллергических заболеваний, наблюдаемого в настоящее время. В определенной мере эту тенденцию поддерживают фармацевтические фирмы, ориентирующие свои разработки в сторону создания новых поколений антигистаминных препаратов или комплексного воздействия на БАВ и усиленно их рекламирующих.

Вместе с тем, лечение аллергических заболеваний — это сложный и трудоемкий процесс, требующий от лечащего врача значительных усилий и времени и основанный, прежде всего, на патогенетическом мышлении. Лишь при таком подходе можно рассчитывать на реальные результаты при лечении аллергических заболеваний.

С другой стороны, нельзя одинаково лечить аллергические заболевания, в основе которых ГНТ и ГЗТ. Это разные патогенезы и разные в связи с этим терапевтические подходы.

Именно с этих позиций — позиций патогенетического мышления, комплексности и дифференцированной терапии ГНТ и ГЗТ мы хотим представить основные направления лечения аллергических заболеваний.

4.1 Общие принципы лечения аллергических заболеваний (ГНТ и ГЗТ).

Прежде всего, надо совершенно четко представлять, что аллергические заболевания никогда не развиваются у совершенно здорового человека — обязательно нужна исходная иммунокомпрометация, которая может клинически не проявляться (иммунодефицит) либо иметь клинические маркеры (иммунная недостаточность). И в первом и во втором случае необходима иммунокоррекция, которая может иметь самостоятельное значение в лечении данного аллергического заболевания. Однако иммунокоррекцию не следует понимать только как применение иммуноактивных препаратов на основе определения иммунограммы. Дело в том, что в подавляющем большинстве случаев иммунодефициты и иммунная недостаточность вторичны и требуют выяснения вызвавшей их причины. Именно выяснение причины иммунокомпрометации и воздействие на нее являются главным условием эффективной иммунокоррекции. Наш клинический опыт позволяет выделить следующие основные причины, лежащие в основе иммунокомпрометации:

— нарушения пищеварения, связанные, прежде всего с дисбактериозом, фер-

ментными и дискинетическими расстройствами;

— регуляторные расстройства, связанные с частыми стрессами или низкой толерантностью к ним, повышенной эмоциональностью или лабильностью нервной системы, нейрососудистыми нарушениями;

— метаболические расстройства, связанные с нарушениями количества и качества питания (прежде всего, белкового питания), патологией печени, эндокринными нарушениями.

Наверное, нет необходимости детализировать средства и методы, направлен-

ные на ликвидацию этих причин, поскольку это индивидуальное творчество каждого врача, однако, есть настоятельная необходимость подчеркнуть, что только этим путем можно реально помочь больным аллергическими заболеваниями. Так, например, у части больных атопическим дерматитом коррекция дисбактериоза приводила к нормализации клинических данных, стойкой и длительной ремиссии. Мы наблюдали больных бронхиальной астмой, у которых применение ноотропов позволило отказаться от ингаляторов и глюкокортикостероидов. Вместе с тем, следует подчеркнуть, что выяснение причин иммунокомпрометации — достаточно длительный и трудоемкий процесс, связанный с обследованиями, консультациями специалистов, тщательным сбором анамнеза и др.,

однако когда истинная причина найдена, можно реально рассчитывать на эффективную помощь.

Воздействие на причину можно сочетать с применением иммунотропных препаратов на основании и под контролем изменений иммунограммы, однако, самостоятельного значения иммунотропные препараты в коррекции иммунодефицитов и иммунной недостаточности не имеют. Из иммунотропных препаратов при аллергических заболеваниях предпочтение следует отдать действующим на макрофагально-фагоцитарную систему (ликопид, нуклеинат натрия, метилурацил, пентоксил и др.), поскольку одним из главных условий качества специфического иммунного ответа является количество и качество антигенпредставляющих клеток.

Источник: kazedu.com

ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

Принцип диагностики аллергических болезней состоит в определении повышенной чувствительности организма к тому или иному аллергену. Следовательно, аллерген является обязательным компонентом при постановке любого теста.

При выполнении диагностических приемов возможно три различных подхода: 1) реакции целого организма, 2) воздействие аллергена на клетки, участвующие а аллергических реакциях, 3) определение титра аллергических антител.

Воздействие аллергеном на клетки. участвующие в аллергических реакциях. Проведение такого рода реакций возможно как in vivo, так и in vitro.

Диагностика in vivo.

Метод кожных проб. Пробы можно проводить у сенсибилизированных людей. Жидкий аллерген либо накапывают на предварительно сделанную оспопрививательным ланцетом царапину, либо вводят шприцем внутрикожно. Если имеется повышенная чувствительность к аллергену, на месте постановки пробы через 15—20 мин появляются краснота и отек. Одновременно ставят пробы к 15—20 аллергенам.

Реакция Праусница-Кюстпера. При прямой реакции здоровому реципиенту вводят внутрикожно 0,1 мл сыворотки крови больного (содержащие антитела), а через 48 ч (антитела фиксируются на коже) в то же место — экстракт аллергена. При положительной реакции через 20—30 мин развивается типичная кожная реакция. При обратной реакции сначала вводят аллерген, а потом сыворотку.

Прямая реакция определяет реагины. Обратная реакция реагиннеспецифична.

Диагностика in vitro.

Воздействие на нейтрофилы — при инкубации нейтрофилов сенсибилизированного человека с аллергеном отмечаются потеря амебоидной активности нейтрофилов (показатель повреждаемости нейтрофилов по В. А.

Фрадкину), внутриклеточные некробиотические изменения (тест альтерации нейтрофилов), лизис клеток (реакция специфического лейколиза).

Воздействие на лимфоциты — реакция бласттрансформации лимфоцитов крови— добавление к культуре лимфоцитов аллергена повышает их митотическую активность, что после 3—7 суток культивирования можно вы- явить по синтезу ДНК (по включению в клетки Н-тимидина), либо по морфологическим показателям (делящиеся лимфоциты изменяют свою морфологию и начинают напоминать бластные клетки).

Воздействие на базофилы— под влиянием аллергена наблюдается дегрануляция базофилов.

Реакция торможения миграции лейкоцитов крови — аллерген тормозит миграцию лейкоцитов сенсибилизированного к этому аллергену человека.

Реакция деграпуляции тучных клеток — под влиянием аллергена. Механизм реакции описан при изложении патогенеза реакций 1-го типа.

Определение титра аллергических антител. радиоиммунологический тест. Аллерген, к ко горому подозревают сенсибилизацию, фиксируют на полимере (например, нерастворимый декстран), в результате образуется нерастворимый полимер-аллергенный конъюгат, который добавляют к исследуемой сыворотке крови больного.

Если в сыворотке крови присутствуют специфические антитела, возникает реакция антиген — антитело. Затем, после удаления из системы всех несвязанных в реакции компонентов, к конъюгату добавляют порцию специально приготовленной моноспецифической сыворотки, содержащей антитела против IgE, которые до этого метятся одним из радиоактивных изо- топов (например, » I). Добавление меченых антител создает условие для новой специфической реакции с антителами IgE, находящимися в сыворотке больного. Измеряя радиоактивность комплекса, оценивают титр IgE.

Источник: scicenter.online